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ELISA檢測中TGF-β1樣本處理方法簡介
近段時間以來,很多客戶來電詢問關(guān)于TGF-β1樣本的處理方法,為了更好的讓客戶了解整個過程,BUNSEN本生整理以供參考。
由于機(jī)體內(nèi)表達(dá)的 TGF-β1是無活性同型二聚體的前體分子,在機(jī)體外,無活性的TGF-β1又稱為latency associated peptide (LAP),在酸性條件下進(jìn)行預(yù)處理即可獲得有活性的TGF-β1,從而用于ELISA檢測。
TGF-β1血清、血漿樣本的活化處理步驟
1、 取40 μL樣本,加入2 mL EP管或者西林瓶中。
2、 加入20 μL 1N HCl于渦旋儀上混合均勻,室溫靜置10 min
3、 加入20 μL 1N NaOH, 混勻。
4、 根據(jù)樣本實際情況,對樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后進(jìn)行檢測。
注:樣本測值計算時應(yīng)乘以總體稀釋倍數(shù)(含活化稀釋和活化后稀釋)
TGF-β1細(xì)胞上清/尿液樣本的活化處理步驟
1、 取100 μL細(xì)胞培養(yǎng)上清或尿液, 加入20 μL 1N HCl于渦旋儀上混合均勻
2、 室溫靜置10 min
3、 加入20 μL 1N NaOH, 混勻后即可進(jìn)行檢測
提醒:以上兩個步驟中活化了的樣本需在2h內(nèi)完成檢測才能保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。細(xì)胞培養(yǎng)基中的動物血清可能含有一定濃度的TGF-β1,因此在檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清時,盡量選擇不含有動物血清的細(xì)胞培養(yǎng)基。如若使用了含有動物血清的細(xì)胞培養(yǎng)基,務(wù)必將細(xì)胞培養(yǎng)基作為對照進(jìn)行檢測,確定培養(yǎng)基中TGF-β1的濃度,最終在計算細(xì)胞培養(yǎng)上清中的TGF-β1濃度時減去培養(yǎng)基中TGF-β1的濃度方為實際樣本濃度
活化試劑的配制:
1、 1 N HCl (100mL): 將 8.33mL 的 12M HCl緩慢加入到 91.67mL 的去離子水中,混合均勻后即可使用。
2、 1N NaOH/0.5M HEPES (100mL):將 10mL濃度為10M NaOH加入80mL的去離子水中,混合均勻后再加入 11.9g 的 HEPES,混勻,用去離子水定容至100mL備用.
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