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以下是本生對影響ELISA試劑盒測定成果的常見原因及對應解決辦法的總結(jié):
一、試劑相關(guān)因素?
試劑質(zhì)量問題?
原因?:使用過期試劑、不同批號混用或非正規(guī)廠家產(chǎn)品可能導致靈敏度下降或假陽性/陰性。
解決?:選擇有“三證"的品牌試劑,避免混用批號,使用前室溫平衡20-30分鐘。
試劑保存不當?
原因?:未按說明書要求儲存(如2-8℃或-20℃),導致活性喪失。
解決?:分裝保存高頻使用試劑,避免反復凍融;OPD等底物需現(xiàn)配現(xiàn)用。
二、樣本相關(guān)因素?
內(nèi)源性干擾?
類風濕因子(RF)?:與IgG非特異結(jié)合導致假陽性??赏ㄟ^使用F(ab)?片段抗體處理樣本。
補體干擾?:激活后交聯(lián)抗體或封閉表位。建議用EDTA抗凝血或56℃加熱滅活補體。
外源性干擾?
溶血/脂血?:血紅蛋白或脂類干擾顯色。需離心后取澄清上清液檢測。
細菌污染?:內(nèi)源性酶(如HRP)導致假陽性。嚴格無菌操作并避免樣本長期存放。
三、操作相關(guān)因素?
加樣誤差?
原因?:加樣量不準、氣泡產(chǎn)生或孔間交叉污染。
解決?:使用校準移液器,加樣至孔底1/3處,避免觸碰孔壁。
溫育問題?
原因?:時間/溫度不達標或蒸發(fā)導致濃度偏差。
解決?:貼封片防蒸發(fā),嚴格按說明書設置溫育參數(shù),水浴減少邊緣效應。
洗滌不凈?
原因?:洗液殘留或洗板針堵塞。
解決?:手工洗板時注滿每孔,自動洗板機定期維護。
四、設備與環(huán)境因素?
儀器校準?
原因?:酶標儀光源不穩(wěn)定或移液器誤差。
解決?:定期校準設備,預熱酶標儀15分鐘以上。
溫濕度控制?
原因?:高溫或光照加速底物降解。
解決?:顯色階段避光,實驗室保持恒溫(20-25℃)。
五、其他注意事項?
方法學選擇?:競爭抑制法重復性較差,優(yōu)先選用雙抗體夾心法等穩(wěn)定性高的方法。
質(zhì)控品使用?:每批次實驗加入陰/陽性對照,監(jiān)控系統(tǒng)誤差。
通過綜合控制上述因素,可顯著提高ELISA檢測的準確性和可靠性。
注:以上資料僅供參考,具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應商。
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